His标签(组氨酸标签)是由6-10个连续的组氨酸残基组成,可插入在目的蛋白的C末端或N末端。 His标签是目前原核表达最常用的标签,也是蛋白纯化的首选标签,主要原因如下: His标签与细菌的转录翻译机制兼容,有利于蛋白表达; His标签分子量非常小,只有084KD,一般不会影响目标蛋白的功能; His标签非常小,不会改变目的蛋白自身的可溶性,相反一些大的标签如MBP,可大大提高融合蛋白的可溶性,尽管目的蛋白本身是不可溶或者折叠不正确

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想做真核表达,对蛋白定位,但是这个eGFP标签在N端,信号肽被夹在标签和目的蛋白中间了,这样的融合蛋白还能正常定位吗? 返回小木虫查看更多 分享至: 更多 snhajn 不然信号肽应该在哪里的 , 换一批 下载小木虫APP 与700万科研达人随时交流 二维码 IOS 安卓 欢迎监督和反馈 :小木虫仅提供交流平台,不对该内容负责。 欢迎协助我们监督管理,共同维护互联网健康,违规贴举报删除请联系邮箱:libolin3@或者 我们保证在7个工作日内给予处理和答复,谢谢您的监督。 -2024 ,小木虫

信号肽在蛋白质分泌过程中起到引导作用,帮助蛋白质转运到正确的亚细胞位置在原核表达系统中,如果目标蛋白不需要分泌到细胞外,或者信号肽的存在可能影响蛋白质的正确折叠和功能,那么就可以考虑切除信号肽

His-tag一般由5到15个组氨酸(histidine)组成对目的蛋白本身特性影响不大,而不像一些标签那样容易形成二聚体,从而影响蛋白的特性;现今最常用的方法就是亲和标签系统,已经成为重组蛋白检测和纯化中一个不可或缺的工具

第二个原因,有些蛋白会在N端含有信号肽,如果将标签蛋白添加在目的蛋白的N端,当目的蛋白在信号肽行使完其功能后就会被剪切掉,这个时候标签蛋

请问高手,我的蛋白序列(G-细菌的)预测着在前28位为信号肽,可能分泌到周质中发挥作用,请问:2)要去掉his-tag(杂志要求的),一般用啥酶切好,能够尽可能甚至无剩余氨基酸,而且酶切效率高,及酶切时目的蛋白损失少,蛋白酶好去除1)如果要做酶动力学及用此纯化蛋白(酶)体外反应体系筛化合物,要不要把信号肽去掉,即直接表达的蛋白序列为(29-后)

2 然后进行WESTERN BLOTING检测看有没有带有HIS标签的蛋白;onlySearchIcon去发帖去发帖丁香园论坛蛋白质和糖学蛋白表达纯化帖子详情separatorseparatorseparatorseparator【求助】在N端连有His -tag会不会因为目的蛋白信号肽的存在而被切除浏览3720·讨论5阿牛楼主发布于2025-05-16IP只看楼主这个帖子发布于 14 年零 265 天前,其 热度最新皮肤科医师His标签的蛋白IPTG诱导浓度一般为02-1mM,和你的质粒特

如果蛋白N端有信号肽什么的,一般只能把tag加在C端可以通过设计引物自己把his-tag融合到目标蛋白的C端或者N端。

首先说明一下我的实验情况:我现在已有构好的 Flag标签+目的蛋白CDS区 的质粒,但是因为的我的目的蛋白的CDS区分为引导序列,核心序列和GPI序列三部分,所以设计质粒时的具体结构是:标签+目的蛋白CDS区 的质粒,但是因为的我的目的蛋白的CDS区分为引导序列,核心序列和GPI序列三部分,所以设计质粒时的具体结构是: 目的蛋白引导序列+目的蛋白核心序列(两个氨基酸)+Flag+目的蛋白核心序列(剩余氨基酸)+目