一般每个抗体可以标记35个生物素,标记时,生物素与抗体的比率受抗体浓度影响,对于10mgml的抗体溶液来说,生物素应超过蛋白12倍摩尔数,对于2mgml的抗体溶液应超过20倍,生物素也可以直接以粉末的形式加入蛋白溶液中。生物素标记蛋白操作方

高浓度的生物素酯会导致多个生物素分子结合在抗体上,因此可能会使所有抗体都被标记由于生物素分子较大,故透析比预料中的要慢,或者用蛋白A

有没有人了解pierce生物素标记蛋白试剂盒的有效期?Biotin和avidin放在-20℃、脱盐柱及HABA放在4℃,放置一年会降低标记效率吗?最近用这个试剂盒标记了2次,第一次由于计算失误,Biotin使用量大概是蛋白的40倍,标记效率Biotin/protein为091;第二次Biotin使用量大概是蛋白的20倍,标记效率Biotin/protein为074,但是我见别人能做到1~3,有人做过吗? 搜索 不知道邀请谁?试试他们 换一换 举报 广告宣传推广 政治敏感、违法虚假信息 恶意灌水、重复发帖 违规侵权、站友争执 附件异常、链接失效 其他 丁香园旗下网站 关于丁香园

一般每个抗体可以标记3-5个生物素,标记时,生物素与抗体的比率受抗体浓度影响,对于10mg/ml的抗体溶液来说,生物素应超过蛋白12倍(摩尔数),对于2mg/ml的抗体溶液应超过20倍,生物素也可以直接以粉末的形式格式:DOC生物素标记蛋白操作方法热度:用标记反应溶液调节抗体浓度到2mg/ml(025ml)。

2 组分 1 次标记 3 次标记 10 次标记 NH -Reactive-Biotin 01 mg/支×1 01 mg/支×3 01 mg/支×10 2 Labeling Buffer 10 mL/瓶×1 10 mL/瓶×1 10 mL/瓶×2 DMF 500 μL/ 支×1 500 μL/ 支×1 500 μL/ 支×2 Filtration tube 05 mL/支×2 05 mL/支×6 05 mL/支×20 试验所1- 产品介绍 Elabscience®生物素标记试剂盒提供了生物素标记所需全部试剂,能简单有效 地对抗体和其他含有伯氨基(NH -)分子的物质进行生物素标记。试剂盒内的生 2

本人最近在做生物素标记体表蛋白(Sulfo-NHS-biotin),根据文献,分别使用了0,5和1,0mg/ml的浓度,标记时间为2小时,4°但在后来的检查时发现标记的蛋白太多了,整个膜上都是条带。

常用蛋白裂解液成分尿素:常用浓度8M硫脲:常用浓度2M DTT:作为还原剂,打开肽链之间的二硫键去污剂:SDS, NP-40, TritonX-100, CHAPS抑制蛋白酶活性的方法细胞裂解后释放蛋白酶,需要抑制其活性,方法有:加入强变性剂低温调节pH,pH 9时很多蛋白酶失活,但要注意目的蛋白是否也失活加入蛋白酶抑制剂,如PMSF蛋白质质谱检测流程蛋白质提取—— 浓度测定—— 蛋白质分级分离(SDS PAGE等)—— 脱盐,富集—— 还原,烷基化—— 酶切—

简介:此文档是关于生物素标记蛋白操作方法的doc文档,编号为,其中主题是关于医学/心理学、行业资料的内容展示

每个反应中生物素试剂的使用量取决于待标记蛋白质的量和浓度试剂盒中包括6个用于抗体标记脱盐的Filtrationtube,不用透析,操作简便,熟练操作其充分溶解,此时生物素的浓度为10mM。

1 氨基偶联生物素化试剂反应示意图 实验试剂和耗材 1) 缓冲液 :DMSO,1×PBS,PBST (PBS+002% tween20) 2) 掌上离心机,一台 3) 生物素标记试剂 EZ-Link NHS-PEG -Biotin (Thermo,货号:) 1 mg, 12 加入 0106 mL 的 DMSO 配置成 10 mM 母液 4) PD Mini加入 70-100 uL 生物素标记后的样品 ,离心,收集流穿( 目标蛋白)。 73 采用透析装置 Slide-A -Lyze 去除游离的生物素 :使用透析比例大于 1:1000 的 比例将生物素化后的蛋白